缓冲液(Buffer solution)通常是由「弱酸及其共轭碱」或「弱碱及其共轭酸」缓冲对所组成的溶液,能够在加入一定量其他物质时减缓 pH 的改变。下面就具体来了解一下关于缓冲液的相关知识。
什么是缓冲液
缓冲液是一种含有共轭酸/碱对的水溶液。 缓冲液的 pH 值范围根据其 pKa 值决定。该 pKa 值定义为 50% 的分子为酸式结构,50% 为碱式结构时的 pH 值。关于缓冲液的一个常规原则是,其 pH 值应保证在 pKa 值左右 1 个 pH 值单位范围内,从而保证其具有良好的缓冲能力。如此可以保证同时有足够的以酸式结构和碱式结构存在的分子在加入 H+ 或者 OH- 时可以将它们中和。这样,缓冲液就可以防止 pH 变化导致的蛋白质稳定性改变。
好的缓冲液须具备的特点
1、水溶性
2、化学稳定性
3、在所需 pH 范围内良好的缓冲能力
4、与分析和实验应用条件具有良好的兼容性
5、与其他溶质具有良好的兼容性
很多物质都可以用于生物缓冲液。常使用的缓冲液成分通常具有接近中性的 pKa 值,可在生理 pH 值范围左右使用。表1 列出了4 种常用的生物缓冲液、各自的 pH 值应用范围及各自可能对蛋白质纯化过程产生影响的优缺点。为保证足够的缓冲能力,这些缓冲液的浓度通常为 25mM。
蛋白质纯化中常用的生物缓冲液。缓冲液在一定 pH 值范围内可保持它们的缓冲能力,部分缓冲液成分会对某些层析过程或者分析实验造成影响。
缓冲溶液的作用
缓冲溶液的作用是在有限的范围内调整溶液的 pH 值使待测溶液的酸度符合分析方法所规定的范围,例如,苯-酚在碱性介质及铁氰 hua 钾存在下,可与 4- 氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料,为了防止芳香胺类的干扰以 pH 在 10士0.2 时为适宜。为此,就需要在待测溶液中加入氨一氯化钱缓冲溶液调整和控制待测溶液的 pH 为 10.0士0.2。
在实际工作中有些分析人员由于不大了解缓冲溶液的作用机理,当所配制和使用的缓冲溶液与规定的数值不相符时,为使缓冲溶液达到要求,就用盐酸或氢氧-化钠等强酸、强碱进行调节,以为这样做可以使缓冲溶液尽快达到所需要的 pH 值,然而,结果却适得其反,这样的溶液 pH 值虽然调对了,可是它的缓冲体系却被破坏了,作用也就失去了,缓冲溶液一般都是由弱酸及其弱酸盐或是弱碱及其弱碱盐组成的一对共轭体。